Склад

• Планшет для ІФА з іммобілізованим інактивованим антигеном ВХА - 2 шт;
• Концентрат (10х) розчину №1 для промивання планшетів - 2 флакони по 40мл;

• Концентрат розчину кон’югату пероксидазного моноклонального анти-gB –

1 флакон, 0,5 мл;

• Розчин №2 для розчинення анти-gB-кон’югату та сироваток - 2 флакони

по 20 мл;

• Позитивна контрольна сироватка, що містить анти-gB-антитіла (К+) - 1 флакон 1,5 мл;
• Негативна контрольна сироватка, що не містить анти-gB-антитіл (К-) - 1 флакон 0,3 мл;
• Розчин хромогену (тетраметилбензидин, ТМБ) з перекисом водню (розчин №3) -1 флакон 25 мл;
• Розчин № 4 для зупинки реакції - 2 флакони по 12 мл.

Фармацевтична група

Тест – система для діагностики in vitro.

Імунобіологічні властивості

Використовується як тест-система для діагностики хвороби Ауєскі

Вид тварин

Свині всіх вікових категорій

Показання до застосування

Застосовують для визначення інфікованих вірусом хвороби Ауєскі свиней серед не вакцинованого поголів’я.

Протипоказання

Тест-систему не застосовують для діагностики хвороби Ауєскі свиней, що щеплені немаркованими (gЕ-позитивними) або маркованими (gЕ-негативними) вакцинами проти хвороби Ауєскі.

Застереження при застосуванні

Тест-система не підлягає застосуванню у випадку порушення цілісності флаконів, наявності сторонніх домішок, плісняви, пластівців, осаду та зміни кольору рідких компонентів.

На всіх етапах аналізу не допускають, щоб підсихала поверхня лунок відмитих планшетів. На всіх етапах інкубації та при спектрофотометрії планшету розчин в лунках не повинен утримувати бульбашки. Змінні наконечники, що контактують з розчином хромогену, повинні бути нові, одноразові! Для додавання хромогену в ході реакції категорично не припускається використання митих змінних наконечників.

Перенесення розчину хромогену (№ 3) з флакону в одноразову ванночку здійснюють переливанням. Не допускається використання скляних або автоматичних піпеток для перенесення розчину №3 з флакону в ванночку.

Взаємодія з іншими засобами

Заборонено використання компонентів з будь-яких інших тест-систем включаючи компоненти з інших партій(серій) тест-систем “ІФА gB-ВХА”.

Особливі вказівки при при вагітності, лактації,несучості

Не існує.

Спосіб застосування та дози:

1.Приготування реагентів

(для проведення аналізу на одному планшеті)

1.1. Розчин № 1 для промивання планшетів.

Для приготування розчину для промивання планшетів (робочого), розчин №1 (10-кратний концентрат) інтенсивно збовтують, розводять у співвідношенні 1:10

дистильованою або деіонізованою водою та ще раз збовтують. Якщо в концентраті випав осад з кристалів, то його підігрівають перед використанням при температурі 37⁰С до повного їх розчинення. (Наприклад: для приготування розчину для промивання 1 планшету необхідно змішати 50 мл розчину № 1 з 450 мл води). Термін зберігання розчину – 24 години при температурі +4⁰С.

1.2. Розчин анти-gB-кон’югату.

Для приготування робочого розчину з розрахунку на 1 планшет слід 10 мл розчину № 2 перенести в окрему пробірку та додати 0,2 мл концентрату розчину анти-gB-кон’югату до отримання кінцевого розведення у робочому розчині 1:50. Отриманий розчин слід ретельно перемішати. Термін зберігання розчину – 24 години при температурі 4⁰С.

1.3. Розчин ТМБ з перекисом водню (розчин № 3) та розчин № 4 для зупинки реакції постачається в готовому вигляді. Термін зберігання розчинів обмежений терміном зберігання тест-системи.

УВАГА!

Розчин № 4 для зупинки реакції (2% розчин сірчаної кислоти) може викликати хімічні опіки в разі попадання на шкіру.

2. Зразки сироваток.

2.1.Для аналізу необхідно 50 мкл сироватки або плазми крові свиней на кожну лунку планшета. Для збільшення точності аналізу слід досліджувати кожну сироватку двічі.

2.2.Для тестування використовують свіжу або заморожену до мінус 20⁰С сироватку (плазму) крові. Сироватку (плазму), що піддають тестуванню, зберігають при 4⁰С не більше 48 годин. Сироватки, що контаміновані мікрофлорою, а також сироватки з вмістом осаду не досліджують.

2.3.Контрольні сироватки (К+, К-) тестують аналогічно сироваткам, що досліджуються. Контрольні сироватки зберігають при температурі 4⁰С. Термін зберігання контрольних сироваток обмежений терміном придатності тест-системи.

3.Проведення аналізу.

Перед використанням всі реагенти тест-набору та сироватки доводять до кімнатної температури та збовтують.

3.1. Переносять необхідну кількість розчину №2 з флакону в одноразову ванночку. За допомогою багатоканальної автоматичної піпетки вносять у лунки планшету з іммобілізованим антигеном ВХА по 50 мкл розчину № 2.

3.2. За допомогою одноканальної автоматичної піпетки вносять у відповідні лунки планшету по 50 мкл контрольних сироваток (К+, К-). (Негативну контрольну сироватку вносять у дві лунки – А1, В1. Позитивну контрольну сироватку вносять у дві лунки – С1 та D1). Контрольні сироватки слід ретельно перемішати в лунці у розчині № 2 триразовим піпетуванням, не торкаючись дна та стінок лунок та не допускаючи виникнення бульбашок.

3.3. За допомогою одноканальної піпетки вносять в лунки планшету по 50 мкл досліджуваних сироваток і ретельно перемішують в розчині № 2 триразовим піпетуванням, не торкаючись дна та стінок лунок та не допускаючи виникнення бульбашок.

УВАГА!

Перед використанням усі сироватки ретельно перемішують. Кожен зразок сироваток відбирають окремим наконечником.

3.4.Накривають планшет кришкою або клейким папером та інкубують його в термостаті при 37⁰С 2 години.

3.5 Промивають планшет розчином для промивання планшету (робочим) 4-5 разів. При промиванні в кожну лунку вносять не менше 0,3 мл розчину для промивання. Після промивання з лунок ретельно видаляють вологу, постукуючи планшетом по фільтрувальному паперу.

3.6.Переносять необхідну кількість розчину анти-gB-кон’югату (робочого) з флакону в одноразову ванночку. За допомогою багатоканальної автоматичної піпетки в усі лунки вносять по 0,1 мл розчину анти-gB-кон’югату.

3.7.Накривають планшет кришкою та інкубують у термостаті при 37⁰С 1 годину.

3.8.Планшет промивають п’ять разів та видаляють вологу.

3.9.Переносять необхідну кількість розчину хромогену (№ 3) з флакону в одноразову ванночку переливанням. За допомогою багатоканальної автоматичної піпетки вносять у лунки по 0,1 мл розчину ТМБ з перекисом водню (розчин № 3).

УВАГА!

Посуд, що використовували для роботи з ТМБ, необхідно ретельно вимити. Розчин ТМБ не повинен контактувати з металами та не підлягати дії прямого сонячного проміння.

3.10.Планшет розміщують у захищеному від прямого сонячного проміння місці при температурі від 21 до 24⁰ С на 15 хвилин.

3.11. Ферментивну реакцію зупиняють внесенням у лунки автоматичною багатоканальною піпеткою по 0,1 мл розчину № 4 (для зупинки реакції). Розчин № 4 додають у лунки в тій же послідовності, що й розчин ТМБ.

3.12. Облік результатів проводять не пізніше 15 хвилин після зупинки реакції. Виміряють оптичну щільність при 450 нм у лунках за допомогою

багатоканального спектрофотометра. Нульовий рівень спектрофотометра встановлюють по повітрю.

УВАГА!

На всіх етапах аналізу не допускають, щоб підсихала поверхня лунок відмитих планшетів. Для цього швидко вносять наступні реагенти в відмиті лунки.

УВАГА!

На всіх етапах інкубації та при спектрофотометрії планшету розчин в лунках не повинен утримувати бульбашки.

4. Облік та інтерпретація результатів аналізу.

4.1.Середнє значення оптичної щільності негативної контрольної сироватки (ОЩк-) розраховують за відповідними показниками в двох лунках за формулою:

ОЩК- =	ОЩА1+ ОЩВ1
	2

4.2.Середнє значення оптичної щільності позитивної контрольної сироватки (ОЩ_К+) розраховують за відповідними показниками в двох лунках за формулою:

ОЩК+ =	ОЩС1 + ОЩD1
	2

4.3.Якщо аналіз досліджуваних сироваток зроблено двічі, то для кожної з них визначають середнє значення оптичної щільності дослідної сироватки (ОЩ досл. сиров.) за формулою:

ОЩ досл.сиров =	ОЩ1 + Щ2
	2

4.4. Відсоток блокування оптичної щільності позитивної контрольної сироватки (% блокування К+) розраховують за формулою:

% блокування К+ =	ОЩК- - ОЩК+	Х 100%
	ОЩК-

4.5 Відсоток блокування оптичної щільності дослідної сироватки (% блокування досл.сиров.) розраховують за формулою:

% блокування досл.сиров. =	ОЩК- - ОЩ досл.сиров.	х 100%
	ОЩК-

4.6. Проведення аналізу є коректним, якщо значення ОЩК- знаходиться у межах 0,8-1,8, а відсоток блокування К+ перевищує або рівний 70%. Якщо значення ОЩК- знаходиться за межами 0,8-1,8 або відсоток блокування К+ нижче 70%, то результати аналізу вважають недостовірними та досліджують сироватки повторно.

4.7. Результати тестування є позитивними, тобто сироватки містять антитіла до gB ВХА, якщо відсоток блокування досліджуваної сироватки (% блокування досл.сиров.) більше або дорівнює 50%. Позитивний результат свідчить про інфікованість свиней

«польовими» штамами ВХА або вакцинацію тварин немаркованими (gB-позитивними) або маркованими (gВ-позитивними) вакцинами проти хвороби Ауєскі. Сироватки, що дають позитивні результати, рекомендують повторно досліджувати на наявність антитіл до gB.

4.8. Результати тестування є негативними (сироватки не містять антитіл до gB ВХА), якщо відсоток блокування досліджуваної сироватки (% блокування досл.сиров.) менше 40%. анти-gB антитіла відсутні в сироватках крові неінфікованих не вакцинованих свиней.

4.9. Результати тестування сироватки є сумнівними, якщо відсоток блокування досліджуваної сироватки (% блокування досл.сиров.) більше або дорівнює 40% або менше 50%. Сироватки, що дають сумнівні результати, повторно досліджують на наявність антитіл до gB. Якщо сумнівні результати отримують у повторному дослідженні, то слід відібрати нові проби сироваток крові в тварин та дослідити їх за допомогою тест-системи “ІФА gB-ВХА”.

Побічні ефекти

Не існує.

Період виведення (каренції)

Не існує.

Спеціальні застереження для осіб і обслуговуючого персоналу, які застосовують ВІП

Робота з компонентами тест-системи повинна проводитись з дотриманням правил роботи в лабораторії з заразним матеріалом, особистої гігієни та поводження хімічними реагентами з урахуванням:

• розчин № 4 для зупинки реакції (2% розчин сірчаної кислоти) може викликати хімічні опіки в разі попадання на шкіру;
• розчин ТМБ не слід піддавати дії окислювачів (металів) та прямих сонячних променів;
• досліджувані сироватки відбирають та зберігають, дотримуючись умов асептики і працюють з ними, як з потенційно небезпечним інфікованим матеріалом;
• не дозволяється піпетувати ротом розчини реагентів.

Особливі заходи безпеки при поводженні з невикористаним ВІП, способи його знешкодження і утилізації

З біологічними маиеріалами слід повидитись, як з потенційно небезпечними, включаючи всі польові штами. Використані планшети і відходли перед утилізацією слід знезаражувати за допомогою сильного окислювача. Невикористані флакони з позитивними, негативними та та досліджуваними сироватками перед утилізацією інактивують автоклавуванням за температури 130 ⁰ С, тиск 2 кг/см² 45 хвилин. Всі тверді відходи після проведення ІФА слід збирати в спеціальний контейнер і автоклавувати протягом 1 години за температури 120 ⁰ С.

Термін придатності

8 місяців. Після розведення або розчинення компоненти тест-системи придатні в період 24 годин.

Умови зберігання і транспортування

В сухому, темному, не доступному для дітей місці при температурі від 2 до 8⁰С.